در این مطالعه، کل فلاونوئیدهای استخراج شده از لیمو خشک عمده مورد بررسی قرار گرفت. عصاره فلاونوئید پوست لیمو به پوست خلفی موش ها پس از ساخت مدل آسیب پوست موش ناشی از UVB اعمال شد.
سپس سرم و بافت پوست موش‌ها با روش‌های بیوشیمیایی و بیولوژیکی مولکولی به منظور شناسایی اثر مداخله‌ای فلاونوئیدهای پوست لیمو بر آسیب پوستی ناشی از UVB در موش‌ها مورد بررسی قرار گرفت و مکانیسم اثر فلاونوئیدهای پوست لیمو مورد بررسی قرار گرفت.
پس از تمیز کردن لیموهای تازه، پوست آن جدا شد و سپس پوست لیمو در فریزر خشک شد و به صورت پودر ریز خرد شد. برای استخراج، 50 گرم پودر ریز با اتانول 70 درصد بر اساس نسبت 15 : 1 مخلوط شد.
به مدت 10 دقیقه در دمای 60 درجه سانتیگراد تحت فراصوت قرار گرفت. پس از تکمیل فرآیند، مخلوط در یک حمام آب در دمای 60 درجه سانتیگراد به مدت 2 ساعت گرم شد.
سپس از یک دستگاه فیلتراسیون مکش برای حذف اتانول استفاده شد و باقیمانده فیلتر سپس چندین بار استخراج شد. فیلتر حاصل با یک اواپراتور چرخشی تقطیر شد و اتانول در همان زمان بازیابی شد.
در نهایت، مایع غلیظ حاصل به مدت 4 ساعت در حالت انجمادی خشک شد و پودر خشک شده نهایی شامل کل فلاونوئیدهای پوست لیمو بود.
اجزای LPF توسط HPLC-DAD (پمپ گرادیان چهارتایی، آشکارساز DAD) آنالیز شدند، شرایط کروماتوگرافی مایع ستون (2.6 میکرومتر، 4.6 میلی متر × 150 میلی متر).
فاز متحرک A: محلول آبی اسید استیک 0.5٪، فاز متحرک B: 100% استونیتریل، دمای ستون: 30 درجه سانتی گراد، سرعت جریان: 0.5 میلی لیتر در دقیقه، طول موج تشخیص: 285 نانومتر.
حجم تزریق: 10 میکرولیتر، زمان اجرای کروماتوگرافی: 40 دقیقه. شرایط شستشوی گرادیان فاز متحرک است.
موش‌های نر هفت هفته‌ای کونمینگ (دانشگاه پزشکی چونگ‌کینگ، چونگ‌کینگ، چین) در تمام آزمایش‌ها مورد استفاده قرار گرفتند.
موهای بلند پشت موش ها با قیچی بریده شد و موهای باقی مانده به آرامی با یک چاقوی موهای زائد خراشیده شد. سپس یک محلول رفع موهای زائد روی همان ناحیه پشت موش ها اعمال شد تا موهای باقی مانده کاملاً از بین برود.
